不同獼猴桃品種潰瘍病抗性鑒定及抗性相關(guān)酶研究

不同獼猴桃品種潰瘍病抗性鑒定及抗性相關(guān)酶研究
易盼盼
【摘要】：當(dāng)前，獼猴桃已在中國(guó)經(jīng)濟(jì)果樹(shù)中占有一席之地，陜西省是獼猴桃種植面積最大的省份，其獼猴桃產(chǎn)業(yè)發(fā)展在中國(guó)獼猴桃產(chǎn)業(yè)發(fā)展中的作用至關(guān)重要。近年來(lái)，陜西省獼猴桃主栽區(qū)潰瘍病發(fā)生嚴(yán)重，對(duì)獼猴桃產(chǎn)業(yè)的發(fā)展產(chǎn)生了巨大的影響。 本研究首先分離純化了陜西省秦嶺北麓獼猴桃主栽區(qū)的潰瘍病病原，并對(duì)該病原進(jìn)行分子鑒定及致病力鑒定。其次對(duì)18份獼猴桃材料進(jìn)行田間調(diào)查，采用人工接種法將病原菌接種到18份獼猴桃離體枝條及盆栽苗枝條上，觀察統(tǒng)計(jì)接種后5、10、15、20d18份材料的感病率，并對(duì)三種鑒定方法的結(jié)果進(jìn)行了比較。同時(shí)在盆栽毛花、金魁、華優(yōu)、金陽(yáng)、紅陽(yáng)獼猴桃接種0、5、10、15、20d后共5個(gè)時(shí)間段進(jìn)行采樣，測(cè)定不同品種枝條苯丙氨酸解氨酶（PAL）、超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、多酚氧化酶（PPO）、過(guò)氧化物酶（POD）的活性變化。最后，以陜西省西安市獼猴桃試驗(yàn)站抗病雄株（SX45872）和感病雌株（西選二號(hào)）以及雜交授粉的198株F1代實(shí)生苗為對(duì)象，利用SSR分子標(biāo)記技術(shù)，并結(jié)合集群分類(lèi)分析法進(jìn)行了獼猴桃抗?jié)儾』蚍肿訕?biāo)記研究，主要研究結(jié)果如下： 1.分離純化出陜西秦嶺北麓獼猴桃主栽區(qū)的潰瘍病病原菌，經(jīng)過(guò)細(xì)菌通用引物和特異性引物擴(kuò)增以及其16S rDNA序列分析，結(jié)果表明：該病原為丁香假單胞菌獼猴桃致病變種(Pseudomonas syringae pv.actindiae)，其16S rDNA序列與已報(bào)道的獼猴桃病原一致。通過(guò)煙草葉片、獼猴桃枝條及葉片接種試驗(yàn)，結(jié)果表明該病原具有侵染煙草和獼猴桃的能力。 2.通過(guò)對(duì)18份獼猴桃材料的田間調(diào)查、離體枝條接種以及盆栽苗活體接種的鑒定，結(jié)果表明：18份獼猴桃材料離體枝條以及盆栽苗接種結(jié)果與田間調(diào)查結(jié)果的基本一致，且都達(dá)到極顯著相關(guān)水平，相關(guān)系數(shù)分別為0.968和0.975。因此，認(rèn)為離體枝條接種和盆栽苗接種可作為獼猴桃潰瘍病的鑒定方法，但與盆栽苗接種相比，離體枝條接種鑒定更簡(jiǎn)單、易操作。 3.盆栽苗接種5、10、15、20d后，毛花、華優(yōu)、金魁、金陽(yáng)和紅陽(yáng)枝條內(nèi)PAL、SOD、POD及PPO活性與活性與接種0d時(shí)相比，均顯著提高（P0.05），但各品種酶活性峰值出現(xiàn)時(shí)間不同；毛花、金魁和華優(yōu)接種后枝條中PAL、SOD、POD及PPO的活性迅速持續(xù)升高，接種10d后達(dá)到高峰，而金陽(yáng)和紅陽(yáng)酶活性增加較緩慢，接種后15d才出現(xiàn)峰值，并低于毛花、金魁及華優(yōu)的峰值。出現(xiàn)峰值之后，活性不再升高呈緩慢下降趨勢(shì)。從接種潰瘍菌后CAT酶活性的變化趨勢(shì)來(lái)看，毛花、華優(yōu)接種后10d后，出現(xiàn)峰值，金魁接種5d后，其酶活性達(dá)到峰值，且這3種獼猴桃材料的峰值均顯著高于接種0d；但金陽(yáng)和紅陽(yáng)接種后CAT活性與接種0d時(shí)差異不顯著。試驗(yàn)證明：PAL、CAT、POD、CAT及PPO的活性與獼猴桃品種潰瘍病抗性相關(guān)。 4.通過(guò)對(duì)51對(duì)SSR引物的篩選，獲得了與抗?jié)儾』蜻B鎖的分子標(biāo)記UDK97-428116，并采用人工離體接種將獲得的標(biāo)記在40個(gè)獼猴桃種質(zhì)資源中進(jìn)行了驗(yàn)證，40份材料中僅有一份材料的鑒定結(jié)果與分子標(biāo)記不同，其他39份材料均與分子標(biāo)記結(jié)果一致，表明了該標(biāo)記的可靠性，從而認(rèn)為SSR標(biāo)記UDK97-428116能夠用于獼猴桃材料潰瘍病抗性鑒定和分子標(biāo)記輔助育種。

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