奉新獼猴桃潰瘍病病原菌鑒定、檢測及室內(nèi)藥劑篩選
鄢明峰
【摘要】：獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病是當(dāng)前危害世界獼猴桃產(chǎn)業(yè)發(fā)展最為嚴(yán)重的病害之一。自2008年前后起,該病在江西省奉新縣陸續(xù)發(fā)生,近年則出現(xiàn)病情不斷加重甚至全園毀滅現(xiàn)象。為了全面認(rèn)識奉新縣獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病菌的病原種類,為該病的防治和后續(xù)研究奠定基礎(chǔ),本研究運用傳統(tǒng)生物學(xué)和分子生物學(xué)手段對奉新獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病菌的種類進行鑒定,并對其群體結(jié)構(gòu)、快速檢測技術(shù)和室內(nèi)化學(xué)藥劑篩選等進行了系列研究,另外,對在奉新縣新出現(xiàn)的獼猴桃另一種潰瘍病的病原進行了鑒定?，F(xiàn)將結(jié)果報道如下:(1)從奉新縣7個果園采集29份獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病樣品,采用稀釋分離法進行病菌分離并作致病性測定,共獲得27個獼猴桃潰瘍病菌菌株,對這些菌株分別進行培養(yǎng)性狀、形態(tài)特征觀察、生理生化試驗和rDNA序列鑒定,確定引起奉新縣獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病病原為丁香假單胞菌獼猴桃致病變種(Pseudomonas syringae pv.actinidiae)。(2)采用多位點序列分析(MLSA)方法,以奉新縣獼猴桃潰瘍病菌的6個管家基因acnB、cts、gapA、gyrB、pfk及rpoD作為靶基因進行生物型鑒定,結(jié)果表明,奉新縣獼猴桃潰瘍病病菌均為生物型3(biovar 3)。隨后,利用潰瘍病菌生物型特異性引物進一步驗證了該結(jié)果的可靠性。(3)采用國內(nèi)外的6對特異性引物對奉新獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病菌DNA進行擴增并結(jié)合各特異性引物靈敏度情況進行分析,隨后將特異性好和靈敏度高的引物進行田間實際病害檢測,結(jié)果表明B1/B2,KNF/KNR引物構(gòu)成的巢式PCR體系可適用于奉新縣潰瘍病病菌的田間樣品檢測。(4)采用牛津杯法測定了29種殺菌劑對獼猴桃潰瘍病菌的室內(nèi)毒力,結(jié)果表明不同的殺菌劑對潰瘍病菌的毒力大小差異顯著。0.3%四霉素、20%溴硝醇的毒力最強,其EC_(50)分別為0.002mg/L、0.068mg/L;80%乙蒜素和1.5%噻霉酮的毒力效果次之,其EC_(50)分別為7.104mg/L、19.974mg/L;再次為3%中生菌素、2%春雷霉素、72%農(nóng)用鏈霉素、80%代森錳鋅、15%絡(luò)氨銅、50%氯溴異氰尿酸、47%春雷·王銅、27.12%堿式硫酸銅、46.1%氫氧化銅9種殺菌劑,其EC_(50)值處于36.069~1705.242之間;30%琥膠肥酸銅、20%中生噻唑鋅、80%喹啉銅、1.5%寧南霉素等16種殺菌劑對潰瘍病菌均無抑菌作用。(5)本論文研究期間,在奉新縣夏季高溫天氣的金果品種果園內(nèi)發(fā)現(xiàn)一種疑似潰瘍病枝干發(fā)病癥狀的新病害(獼猴桃夏季枝干潰瘍病)。通過對分離純化到的20株菌株進行培養(yǎng)性狀、形態(tài)特征觀察、生理生化試驗、致病性測定、結(jié)合16s rDNA、carA、atpD、recA、特異性carA片段等序列分析,確定引起獼猴桃夏季枝干潰瘍病病原為胡蘿卜軟腐果膠桿菌獼猴桃亞種(Pectobacterium carotovorum subsp.actinidiae)。
圖3 葉潰瘍典型癥狀（紅陽品種）（1：葉潰瘍初期癥狀；2：葉潰瘍中期癥狀；3：葉潰瘍后期癥狀）
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