獼猴桃雄性基因RAPD標(biāo)記的研究
姚春潮
【摘要】：本研究以美味獼猴桃20個(gè)品種(株系)、中華獼猴桃15個(gè)品種(株系)及美味獼猴桃海瓦德×秦雄201人工控制雜交群體14個(gè)單株共計(jì)49份材料為試材,首先以親本海瓦德和秦雄201的DNA為模板,對隨機(jī)引物進(jìn)行篩選,然后以F_1代6個(gè)植株的DNA等量混合的雌性DNA樣與雄性DNA樣為模板,對引物進(jìn)一步篩選,最后用雜交組合F_1代個(gè)體DNA為模板,獲得了與獼猴桃雄性基因連鎖的RAPD標(biāo)記S1032_(850)和S79_(750),并對所得標(biāo)記的有效性在中華獼猴桃和美味獼猴桃上進(jìn)行了驗(yàn)證。同時(shí)對獲得的與獼猴桃雄性基因連鎖的RAPD標(biāo)記S1032_(850)進(jìn)行了測序及序列相似性分析。取得的主要結(jié)果如下: 1.通過對300個(gè)隨機(jī)引物的篩選和研究,得到了與獼猴桃雄性基因連鎖的RAPD標(biāo)記S1032_(850)和S79_(750)。在中華獼猴桃、美味獼猴桃雌雄個(gè)體上進(jìn)一步驗(yàn)證發(fā)現(xiàn):標(biāo)記S1032_(850)存在于研究所用的22株雄株中,在27株雌性個(gè)體中只有4株存在標(biāo)記片段S1032_(850);標(biāo)記S79_(750)在22株雄株中有19株存在(在F_1代6株雄株有5株存在),在27株雌性個(gè)體中有13株存在標(biāo)記片段S79_(750)(在F_1代6株雌株有1株存在)。表明獼猴桃雄性基因連鎖的標(biāo)記S1032_(850)與實(shí)際符合率高于標(biāo)記S79_(750)。 2.從美味獼猴桃“秦雄201”親本和中華獼猴桃“江西78-1”中分別回收了特異標(biāo)記S1032_(850)的DNA片段,對它們進(jìn)行了克隆、測序,獲得了S1032_(850)標(biāo)記的核苷酸序列,其由867 bp的特定堿基序列組成。將來自于中華獼猴桃雄性標(biāo)記S1032_(850)的特定堿基序列片段登陸Genbank,其登陸號(hào)為AY336259。為進(jìn)一步將RAPD標(biāo)記轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記和利用特定堿基序列及基因連鎖圖譜克隆雄性基因奠定基礎(chǔ)。 3.利用BLAST工具對美味獼猴桃和中華獼猴桃特異標(biāo)記S1032_(850)的DNA片段堿基序列進(jìn)行了相似性分析,兩序列的相似性達(dá)97%。在CBI庫中,利用BLAST工具對美味獼猴桃特異標(biāo)記S1032_(850)的DNA序列相似性分析發(fā)現(xiàn),該序列與其它生物體DNA序列同源性較小,為獼猴桃基因組所特有。
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